DETECÇÃO FENOTÍPICA DE PENICILINASE EM Staphylococcus spp.

BETALACTAMASE FENÓTIPO PC1 (MEDIADA PELO GENE blaZ)

• DEFINIÇÃO

São enzimas que pertencem à classe molecular A da classificação de Ambler, sendo sua atividade hidrolítica inibida por inibidores de Betalactamase.

• CLASSIFICAÇÃO

1. São Serino-Betalactamases;
2. Pertence à classe molecular A da classificação de Ambler;
3. Pertence ao grupo funcional 2a da classificação de Bush-Jacoby-Medeiros.

• PERFIL HIDROLÍTICO

1. Benzilpenicilinas;
2. Aminopenicilinas lábeis;
3. Ureidopenicilinas lábeis;
4. Carboxipenicilinas lábeis.

• INIBIÇÃO POR INIBIDORES DE BETALACTAMASE

1. Sim.

• FORMA DE DISSEMINAÇÃO

1. São disseminados de um microrganismo para o outro através de conjugação e troca de plasmídios.

• ANTIMICROBIANOS UTILIZADOS NA DETECÇÃO

1. Penicilina G

• COMO DETECTAR FENOTIPICAMENTE

1. ANTIBIOGRAMA COM O DISCO DE PENICILINA G;
2. TESTE DA CEFALOSPORINA CROMOGÊNICA;
3. TESTE IODOMÉTRICO.

ANTIBIOGRAMA COM O DISCO DE PENICILINA G

• Preparar uma suspensão da cultura pura de Staphylococcus spp. equivalente a escala 0,5 Macfarland e semear em uma placa de Ágar Mueller Hinton;
• Colocar o disco de Penicilina G sobre o meio com o microrganismo semeado;
• Incubar por 18-24 horas e realizar a leitura do halo de inibição;
• POSITIVO: Ausência de halo de inibição e/ou presença de halo de inibição com as bordas deformadas;
• NEGATIVO: Presença de halo de inibição dentro da faixa de sensibilidade estabelecida e ausência de deformidades no halo de inibição.

TESTE DA CEFALOSPORINA CROMOGÊNICA

• Colocar uma gota de solução fisiológica estéril sobre um disco de Nitrocefin (Cefalosporina cromogênica) e espalhar a colônia de Staphylococcus sobre o disco.
• POSITIVO: Ocorre mudança da cor da cefalosporina de amarelo para vermelho;
• NEGATIVO: A cefalosporina se mantém amarela.

TESTE IODOMÉTRICO

• Umedecer uma fita de papel de filtro com iodo (lugol para Gram) e colocar sobre uma lâmina de vidro ou na parte interna da própria tampa da placa com a bactéria a ser testada;
• Passar a colônia sobre a fita com o auxílio de uma alça descartável;
• Realizar a leitura em até no máximo 10 minutos;
• POSITIVO: No ponto de inoculação da bactéria na fita, esta altera de cor marrom escura para branca;
• NEGATIVO: Não há alteração de cor da fita.

EXEMPLO DE DETECÇÃO

Imagem 1: Teste de sensibilidade aos antimicrobianos em uma
cepa de Staphylococcus aureus. Note na ponta da seta a ação
da enzima Penicilinase (o halo de inibição da Penicilina G está
menor que 26 mm (EUCAST 2017) e apresenta-se irregular,
isto é compatível com a produção de Penicilinase.

Imagem 2: Detalhe do disco de
Penicilina G com o halo deformado.